نتیجہ پہلے:
چاروں تکنیکوں-پی سی آر ، کیو پی سی آر ، آر ٹی پی سی آر ، اور آر ٹی کیو پی سی آر-پولیمریز چین ری ایکشن (پی سی آر) پر مبنی ہیں ، بنیادی طور پر ان کے اطلاق کے شعبوں اور پتہ لگانے کے اہداف میں مختلف ہیں۔
- پی سی آر بنیادی طور پر ڈی این اے تسلسل کی وسعت اور پتہ لگانے کے لئے استعمال ہوتا ہے۔
- کیو پی سی آر ڈی این اے یا سی ڈی این اے مواد کی اصل وقت کی مقدار کا پتہ لگانے کی اجازت دیتا ہے۔
- RT-PCR بنیادی طور پر RNA انووں کی وسعت اور پتہ لگانے کے لئے استعمال ہوتا ہے۔
- RT-QPCR RT-PCR اور QPCR تکنیک کو مل کر RNA انووں کا مقداری تجزیہ کرنے کے لئے۔
▆ I. معیاری پی سی آر
معیاری پی سی آر ، جسے پہلی نسل کے پی سی آر کے نام سے بھی جانا جاتا ہے ، ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے کو بطور ٹیمپلیٹ اور ڈی این ٹی پی کے طور پر ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے کو خاص طور پر بڑھانے کے لئے سبسٹریٹ کے طور پر استعمال کرتا ہے۔ اس کے بعد ایگروز جیل الیکٹروفورسس مصنوعات کے معیار کے تجزیے کے لئے استعمال ہوتا ہے۔
پی سی آر کے عمل کو تقریبا three تین بنیادی مراحل میں تقسیم کیا جاسکتا ہے: اعلی درجہ حرارت کی کمی (تقریبا 95 ڈگری) ، کم درجہ حرارت اینیلنگ (55 اور 60 ڈگری کے درمیان) ، اور اعتدال پسند درجہ حرارت کی توسیع (تقریبا 72 72 ڈگری ، ڈی این اے پولیمریز کے لئے زیادہ سے زیادہ رد عمل کا درجہ حرارت)۔
متعدد چکروں کے بعد ، اینیلنگ ، اور توسیع کے متعدد چکروں کے بعد ، ہدف جین کو لاکھوں بار بڑھایا جاسکتا ہے۔ جیل الیکٹروفورسس کا استعمال بڑھا ہوا ڈی این اے (شناخت اور طہارت کے ل its اس کے سالماتی وزن کی بنیاد پر ڈی این اے کو الگ کرنا) کا پتہ لگانے کے لئے استعمال کیا جاسکتا ہے۔
▆ ii. مقداری ریئل ٹائم پی سی آر (کیو پی سی آر)
مقداری ریئل ٹائم پی سی آر ، دوسری نسل کا پی سی آر ، پی سی آر امپلیفیکیشن عمل کے توسیع کے مرحلے کے دوران فلوروسینٹ پروب لیبل لگا ہدف جینوں سے ریئل ٹائم فلوروسینٹ سگنل جمع کرتا ہے۔ ہدف جین کی کاپی نمبر یا اظہار کی سطح کا تعین تین پیرامیٹرز کے مابین تعلقات کے ذریعے کیا جاتا ہے: فلوروسینٹ سگنل ، سی ٹی ویلیو ، اور ہدف جین کی ابتدائی حراستی۔ تاہم ، چونکہ اس کے مطلق مقداری تجزیہ کے نتائج CT اقدار اور معیاری منحنی خطوط پر منحصر ہیں ، لہذا نام نہاد "مقدار" ایک لحاظ سے رشتہ دار ہے۔ مزید یہ کہ اس کی کھوج کی حساسیت ، درستگی اور قرارداد کم کاپی ہدف جین ٹیمپلیٹ کی تعداد میں ٹھیک ٹھیک اختلافات کی شرائط کے تحت محدود ہے۔ کیو پی سی آر میں عام طور پر استعمال ہونے والے دو فلوروسینس طریقے تقمان تحقیقات اور ایس وائی بی آر گرین ہیں۔
▆ iii. ریورس ٹرانسکرپٹ پی سی آر (آر ٹی پی سی آر)
ریورس ٹرانسکرپشن پی سی آر (آر ٹی پی سی آر) میں ریورس آر این اے اسٹرینڈ کو تکمیلی ڈی این اے (آر این اے پر منحصر ڈی این اے پولیمریز ، یا ریورس ٹرانسکرپٹیس کا استعمال کرتے ہوئے) میں ریورس ٹرانسکرپٹ کرنا شامل ہے ، جو اس کے بعد پی سی آر کے ذریعے ڈی این اے امپلیفیکیشن کے ٹیمپلیٹ کے طور پر استعمال ہوتا ہے (ڈوکسینوکلیوٹائڈ پرائمر اور ڈی این اے پر منحصر ڈی این اے پولیمریز کا استعمال کرتے ہوئے)۔ اس کے بعد ہر سائیکل معیاری پی سی آر پروٹوکول کے بعد ، رقم کو دگنا کردیتی ہے۔ ٹیمپلیٹ آر این اے کل آر این اے ، ایم آر این اے ، یا وٹرو نقل شدہ آر این اے مصنوعات میں ہوسکتا ہے۔
▆ iv. ریئل ٹائم ریورس ٹرانسکرپٹ پی سی آر (آر ٹی کیو پی سی آر)
ریئل ٹائم ریورس ٹرانسکرپشن پی سی آر (آر ٹی-کیو پی سی آر) آر ٹی پی سی آر اور کیو پی سی آر تکنیک کو جوڑتا ہے تاکہ مقداری طور پر آر این اے انووں کا تجزیہ کیا جاسکے۔ RT-QPCR بڑے پیمانے پر RNA اظہار کی سطح کے مطالعے میں استعمال ہوتا ہے ، جیسے جین اظہار تجزیہ اور وائرل بوجھ کا پتہ لگانا۔
