SweMagrose پروٹین ایک اینٹی باڈی پیوریفائیڈ مقناطیسی موتیوں کی مالا ہے۔

پروٹین A سیل کی دیوار کی سطح کا پروٹین ہے جو Staphylococcus aureus میں پایا جاتا ہے جس کا مالیکیولر وزن 42kDa ہے۔ پروٹین اے اور پروٹین جی عملی طور پر ایک جیسے ہیں اور خاص طور پر ممالیہ امیونوگلوبلین (Ig) سے منسلک ہو سکتے ہیں۔ ریکومبیننٹ پروٹین A اور G کو مناسب ترمیم کے ساتھ مقناطیسی موتیوں سے منسلک کیا جا سکتا ہے جو امیونوپریسیپیٹیشن یا اینٹی باڈی صاف کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ پروٹین A مقناطیسی موتیوں کی مالا انسانی IgG1، IgG2، IgG4، ماؤس IgG2a، IgG2b کے مدافعتی عمل کے لیے موزوں ہیں، جبکہ پروٹین G مقناطیسی موتیوں کی مالا انسانی IgG1، IgG2، IgG3، IgG4، IgG2، IgG2، ماؤس کے مدافعتی عمل کے لیے موزوں ہیں۔ IgG3، چوہا IgG1، IgG2a، IgG2b، IgG2c پولی کلونل اینٹی باڈیز۔ (مخصوص معلومات کے لیے جدول I دیکھیں)

یہ پروڈکٹ خود تیار شدہ اور تیار کردہ پروٹین A پروٹین کے لیبل والے مقناطیسی موتیوں کو اپناتی ہے، مارکیٹ میں ملتی جلتی مصنوعات کے مقابلے، یہ پروڈکٹ اینٹی باڈیز کو زیادہ موثر طریقے سے باندھتی ہے اور اس کی غیر مخصوص بائنڈنگ کی شرح کم ہوتی ہے، یہ آپٹمائزڈ بفر کے ساتھ مل کر ہو سکتا ہے۔ امیونوپریسیپیٹیشن تجربات کے لیے آسان اور موثر؛ یہ بڑے پیمانے پر سیل لائسیٹس، سیلولر سیکریشن سپرنٹنٹس، سیرم، جلودر وغیرہ جیسے نمونوں میں ہدف پروٹین کی تنہائی اور تطہیر میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔

گیلی برف کے ساتھ جہاز؛ 2-8 ڈگری پر اسٹور کریں، 12 ماہ کے لیے درست۔

اینٹی باڈی صاف کرنے سے متعلق ریجنٹ فارمولیشنز مندرجہ ذیل کا حوالہ دیتے ہیں، صارف کو مخصوص تجرباتی حالات کے مطابق ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے.

دستی طریقہ کار (مثال کے طور پر ماؤس ایسکائٹس آئی جی جی کو صاف کرنا)

1. نمونہ پروسیسنگ: 500 μL جلودر کا نمونہ لیں، بائنڈنگ واش بفر کو 500 μL بنانے کے لیے شامل کریں، اگر نمونے میں زیادہ پروٹین پریسیپیٹیٹس ہیں، تو تجربات کے لیے سپرناٹینٹ کو سینٹری فیوج کریں، جو اینٹی باڈی کی پاکیزگی کو بہتر بنا سکتا ہے۔

2. میگنیٹک بیڈ پریٹریٹمنٹ: اینٹی باڈی پیوریفائیڈ میگنیٹک بیڈز کو 30 سیکنڈ کے لیے کافی حد تک بحال کرنے کے لیے ورٹیکس کریں، 100 μL کا 50% (v/v) SweMagrose پروٹین ایک اینٹی باڈی پیوریفائیڈ میگنیٹک بیڈز کو ایک اور نئی 1.5 ملی لیٹر EP ٹیوب میں استعمال کریں، اسے میگنیٹک طور پر ڈس پیریٹ کریں سپرنٹنٹ، اسے 1 سے دھوئے۔ دو بار کے لیے بائنڈنگ واشنگ بفر کا ایم ایل، اور پھر مقناطیسی طور پر خواہش کرنے کے بعد سپرنٹنٹ لیں۔

نوٹ: موتیوں کی مقدار کو نمونے میں اینٹی باڈی کی مقدار کے مطابق ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔

3. اینٹی باڈی جذب: مرحلہ 1 میں پروسیس شدہ نمونے کو مرحلہ 2 میں مقناطیسی موتیوں میں شامل کریں اور اچھی طرح مکس کریں، EP ٹیوب کو روٹری مکسر میں رکھیں یا دستی طور پر ٹیوب کو کمرے کے درجہ حرارت (تقریبا 25 ڈگری) پر آہستہ سے گھمائیں۔ مقناطیسی موتیوں کے نمونے کے ساتھ مکمل رابطہ کریں، اسے 15 منٹ تک پلٹائیں، اسے مقناطیسی جداکار ریک پر رکھیں 30 سیکنڈ، اور پھر سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیں۔

4. میگنیٹک بیڈ واشنگ: EP ٹیوب میں 1 ملی لیٹر بائنڈنگ واش بفر شامل کریں، ہلتے ہوئے دوبارہ لگائیں اور پھر 30 سیکنڈ تک مقناطیسی طور پر جذب کریں۔ سپرنٹنٹ کو ضائع کریں اور آپریشن کو 3 بار دہرائیں۔

5. اینٹی باڈی اخراج: اوپر بیان کیے گئے مقناطیسی موتیوں کے ساتھ EP ٹیوبوں میں 0.5~10 mL eluent شامل کریں، اور پائپٹنگ یا بھنور کے ذریعے ٹیوبوں کو تیزی سے دوبارہ معطل کریں، اور پھر آہستہ سے ٹیوبوں کو ٹرن اوور مکسر میں یا ہاتھ سے کمرے کے درجہ حرارت (تقریباً 25 ڈگری) پر گھمائیں، بعد میں مقناطیسی سکشن کے ذریعے ٹیوبوں کو الگ کریں۔ 10 منٹ کے لیے پلٹیں، اور پھر سپرنٹنٹ کو نئی EP ٹیوبوں میں جمع کریں۔

6. اینٹی باڈی نیوٹرلائزیشن: مرحلہ 5 میں اینٹی باڈی ایلیویٹ میں نیوٹرلائزیشن سلوشن کی ایک خاص مقدار شامل کریں، عام طور پر اینٹی باڈی ایلیویٹ کے حجم کا 1/10 (مثال کے طور پر، اگر اینٹی باڈی ایلیویٹ 500 μL ہے، شامل کیے جانے والے نیوٹرلائزیشن سلوشن کی مقدار 50 μL ہے) ، تاکہ ایلوٹڈ اینٹی باڈی کی پی ایچ ویلیو کو غیر جانبدار ماحول میں برقرار رکھا جائے، جو دیکھ بھال کے لیے موزوں ہے۔ اینٹی باڈی کی حیاتیاتی سرگرمی اور اینٹی باڈی کے غیر فعال ہونے سے بچنا۔

7. مقناطیسی موتیوں کے علاج کے بعد: استعمال کے بعد موتیوں کو ایلیوشن کے محلول سے دو بار دھوئیں، مقناطیسی طور پر الگ کریں، اور سپرناٹینٹ کو ضائع کر دیں۔ پھر بائنڈنگ واشنگ محلول کے ساتھ تین بار دھوئیں، مقناطیسی طور پر الگ کریں، اور سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیں۔ موتیوں کو 200 µL تحفظ کے محلول کے ساتھ دوبارہ معطل کریں، اور پھر 2~8 ڈگری پر اسٹور کریں۔

1. براہ کرم اینٹی باڈی صاف کرنے سے پہلے ان ہدایات کو غور سے پڑھیں۔

2. موتیوں کو منجمد یا سینٹری فیوج نہ کریں کیونکہ یہ موتیوں کے ناقابل واپسی جمع ہونے کا سبب بن سکتا ہے۔

3. دستی آپریشن کے لیے مقناطیسی علیحدگی کے فریم کے استعمال کی ضرورت ہوتی ہے۔

ٹیبل 1

صرف تحقیق کے لیے استعمال کریں۔ تشخیصی یا علاج کے طریقہ کار میں استعمال کے لیے نہیں!

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: swemagrose پروٹین ایک اینٹی باڈی صاف شدہ مقناطیسی موتیوں کی مالا، چین swemagrose پروٹین ایک اینٹی باڈی پیوریفائیڈ مقناطیسی موتیوں کے مینوفیکچررز، سپلائرز، فیکٹری