میگ بائنڈ اینیمل ٹشو/ سیل ٹوٹل آر این اے کٹ

 

پروڈکٹ کا نام	بلی نہیں	سپیک
میگ بائنڈ اینیمل ٹشو/ سیل ٹوٹل آر این اے کٹ	G3607-50T	50 T

 

 

یہ کٹ جانوروں کے ٹشوز یا کلچرڈ سیلز سے نیوکلک ایسڈز کو خاص طور پر آپٹمائزڈ لیسز بفر کے ذریعے جاری کرتی ہے، اور پھر خاص طور پر جانوروں کے ٹشوز یا کلچرڈ سیلز سے کل RNA کو خاص طور پر RNA کو بائنڈنگ کرنے کے لیے ڈیزائن کیے گئے سپر پیرا میگنیٹک میگنیٹک بیڈز کے ذریعے جوڑتی ہے، جو سطح پر موجود بقایا نجاست کو دور کرنے کے لیے کلی کیے جاتے ہیں۔ موتیوں کی، اور پھر آخر میں اعلی طہارت حاصل کرنے کے لئے eluted آر این اے یہ کٹ نامیاتی ریجنٹس جیسے فینول اور کلوروفارم کی ضرورت کو ختم کرتی ہے، اس کا مقناطیسی وقت کم ہوتا ہے، کام کرنا آسان ہے، اور اس میں کثیر قدمی سینٹرفیوگریشن کی ضرورت نہیں ہوتی ہے، اور 5-20 سے اعلیٰ پاکیزگی والے RNA کو تیزی سے نکالنے کی اجازت دیتی ہے۔ ملی گرام جانوروں کے بافتوں یا تازہ مہذب خلیات (106-107)۔ نکالا ہوا آر این اے براہ راست مختلف مالیکیولر بائیولوجی تجربات میں استعمال کیا جا سکتا ہے جیسے کہ RT-PCR، RT-qPCR، ناردرن بلاٹ، ان وٹرو ٹرانسلیشن، RNase تحفظ پرکھ اور مالیکیولر کلوننگ۔

 

 

Proteinase K, DNase اور DTT سلوشن گیلی برف کے ساتھ بھیجے جاتے ہیں، جو -20 ڈگری پر محفوظ ہوتے ہیں؛ دیگر ریجنٹس بھیجے جاتے ہیں اور کمرے کے درجہ حرارت پر محفوظ کیے جاتے ہیں۔ 12 ماہ کے لیے درست۔

 

 

اجزاء نمبر	جزو	G3607-50T
G3607-1	بفر آر ایل	30 ملی لیٹر
G3607-2	بفر RW1	12 ملی لیٹر (استعمال سے پہلے 18 ملی لیٹر اینہائیڈروس ایتھنول شامل کریں)
G3607-3	بفر RW2	18 ملی لیٹر (استعمال سے پہلے 72 ملی لیٹر اینہائیڈروس ایتھنول شامل کریں)
G3607-4	SweMag موتیوں کی مالا	1 ملی لیٹر
G3607-5	ڈی ٹی ٹی حل	1.2 ملی لیٹر
G3607-6	پروٹینیز K	500 μL
G3607-7	ڈی نیس	500 μL
G3607-8	10×DNase بفر	1 ملی لیٹر
G3607-9	نیوکلیز سے پاک پانی	12 ملی لیٹر
دستی		ایک کاپی

 

 

1. اگر بفر آر ایل میں ایک ورن بن گئی ہے، تو اسے 37 ڈگری پر گرم کریں جب تک کہ ورن مکمل طور پر تحلیل نہ ہوجائے۔ کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا ہونے کے بعد اسے استعمال کریں۔

2. آپریشن سے پہلے، بفر RL1 میں DTT محلول کا مناسب حجم 4% کی حتمی ارتکاز میں شامل کریں ( بفر RL1 کے 1 ملی لیٹر میں 40 μL DTT محلول شامل کریں۔ اسے استعمال سے فوراً پہلے تیار کر لیا جائے۔ اس مرکب کو 4 ڈگری پر ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔ ایک ماہ کے لیے۔)

3. استعمال سے پہلے بفر RW1 اور Buffer RW2 میں اینہائیڈروس ایتھنول کی مخصوص مقدار (بوتل دیکھیں) شامل کریں۔

4. نکالے گئے نمونے کی مقدار کے مطابق 60% isopropyl الکحل (استعمال کے لیے تیار) پہلے سے تیار کریں۔

5. براہ کرم گرائنڈر کو پہلے سے ٹھنڈا کریں اگر گرائنڈر سے ٹشو پیس رہے ہوں۔

6. اپنا مقناطیسی اسٹینڈ اور 1.5 ملی لیٹر RNase فری سینٹری فیوج ٹیوبیں فراہم کریں۔

 

 

1. نمونے کی تیاری:

a جانوروں کے بافتوں کی ہم آہنگی:

تازہ یا منجمد ٹشو کو -80 ڈگری پر نکالیں یا جانوروں کے ٹشو جو RNAsolid Tissue RNA Stabilization Solution (G3019 کی سفارش کی جاتی ہے) میں محفوظ کریں، انہیں 1.5 ملی لیٹر سینٹرفیوج ٹیوب یا خصوصی پیسنے والی ٹیوب میں رکھیں جس میں 2-3 پیسنے والی موتیوں کی مالا شامل ہو۔ 3 ملی میٹر کا قطر (G0203-150G تجویز کردہ)۔ فوری طور پر اپنے نمونے میں DTT محلول کے ساتھ تیار کردہ 500 uL بفر RL1 شامل کریں۔ کم درجہ حرارت پر ٹشو ہوموجنائزر (KZ-5F-3D تجویز کردہ) کا استعمال کرتے ہوئے ٹشو کو اچھی طرح سے پیس لیں (اگر ٹشو کو اچھی طرح سے ہم آہنگ نہیں کیا گیا ہے، تو RNA کی پیداوار اور معیار متاثر ہوگا) 10 µL پروٹیناز K، اچھی طرح مکس کریں، اور پھر 56 ڈگری پر 10-15 کے لیے انکیوبیٹ کریں۔ منٹ اور سینٹری فیوج 12،000 rpm پر 5 منٹ کے لیے 4 ڈگری پر۔

ب معطلی کے خلیات

سسپنشن کلچر سیلز کو کلچر میڈیم کے ساتھ مل کر 1.5 ملی لیٹر RNase فری سینٹری فیوج ٹیوب میں منتقل کریں، 1،000 rpm پر 5 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کریں، سسپنشن کلچر سیلز (106-107) کو جمع کریں، آہستہ سے اسپائریٹ کریں اور سپرناٹینٹ کو ضائع کریں، سیل پرسیپیٹیٹ میں 500 μL بفر RL1 شامل کریں (یقینی بنائیں کہ ڈی ٹی ٹی سلوشن کو استعمال کرنے سے پہلے شامل کیا گیا ہے) اور پائپیٹ اور یکساں طور پر پھونکیں جب تک کہ کوئی واضح تیز نہ ہو۔ پھر 10 µL Proteinase K شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں اور 56 ڈگری پر 10-15 منٹ، سینٹری فیوج 12،000 rpm پر اور 4 ڈگری پر 5 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔

c ملحق خلیات

d خلیوں سے گروتھ میڈیم کو ہٹا دیں اور پھر 1×PBS بفر (pH 7.4) سے دھو لیں۔ کلچرڈ سیلز میں Buffer RL1 کی مناسب مقدار شامل کریں (براہ کرم اس بات کو یقینی بنائیں کہ DTT سلوشن استعمال کرنے سے پہلے شامل کیا گیا ہے)، ڈش کو افقی طور پر رکھیں تاکہ لیسیٹ خلیات کی سطح پر یکساں طور پر تقسیم ہو جائے اور خلیات کو لیس کریں، اور پھر آہستہ سے پھونک دیں۔ خلیات کو مکمل طور پر ختم کرنے کے لیے پپیٹ کے ساتھ، خلیات پر مشتمل 500 μL lysate کو 1.5 mL RNase فری میں منتقل کریں۔ بالترتیب سینٹری فیوج ٹیوبیں، اور پھر 10 µL Proteinase K شامل کیا گیا، اچھی طرح ملایا گیا اور 15 منٹ کے لیے 56 ڈگری پر انکیوبیٹ کیا گیا، 12 پر سینٹرفیوج کیا گیا،000 rpm پر 4 ڈگری پر 5 منٹ کے لیے۔

2. سپرنٹنٹ کو ایک نئی 1.5 ملی لیٹر RNase فری سینٹری فیوج ٹیوب میں منتقل کریں۔

نوٹ: کسی بھی بارش کو پائپ نہ کریں۔

3. سینٹری فیوج ٹیوب میں 60% isopropanol کا مساوی حجم شامل کریں (اس مقام پر بارش ہو سکتی ہے)، پائپٹنگ یا بھنور کے ذریعے مکس کریں، پھر 20 μL SweMag Beads شامل کریں (SweMag Beads کو استعمال کرنے سے پہلے اچھی طرح سے ہلانے کی ضرورت ہے جب تک کہ اچھی طرح منتشر نہ ہو جائے) پائپٹنگ یا بھنور کے ذریعے مکس کریں۔

4. موتیوں کو کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ تک کھڑے رہنے دیں، اور اس عمل کے دوران، موتیوں کو سسپنشن میں رکھنے کے لیے کئی بار پھونکنے اور ملانے کے لیے پپیٹ کا استعمال کریں۔

5. سینٹری فیوج ٹیوب کو مقناطیسی اسٹینڈ میں منتقل کریں اور اسے 30 سیکنڈ تک کھڑا رہنے دیں۔ جب سپرنیٹنٹ صاف ہو جائے تو اسپائریٹ کریں اور سپرنٹنٹ کو ضائع کریں۔

6. بفر RW1 کا 500 μL شامل کریں، مقناطیسی اسٹینڈ کو ہٹائیں، اس وقت تک پھونکنے کے لیے پائپیٹ کا استعمال کریں جب تک کہ مقناطیسی موتیوں کے اچھی طرح منتشر نہ ہو جائیں، سینٹری فیوج ٹیوب کو مقناطیسی ریک میں منتقل کریں اور اسے 30 سیکنڈ تک کھڑا رہنے دیں۔ جب سپرنیٹنٹ صاف ہو جائے تو اسپائریٹ کریں اور سپرنٹنٹ کو ضائع کریں۔

7. بفر RW2 کا 500 μL شامل کریں، مقناطیسی اسٹینڈ کو ہٹائیں، اس وقت تک پھونکنے کے لیے پائپیٹ کا استعمال کریں جب تک کہ مقناطیسی موتیوں کو اچھی طرح سے منتشر نہ کر دیا جائے، سینٹری فیوج ٹیوب کو مقناطیسی اسٹینڈ میں منتقل کریں اور اسے 30 سیکنڈ تک کھڑا رہنے دیں۔ جب سپرنیٹنٹ صاف ہو جائے تو اسپائریٹ کریں اور سپرنٹنٹ کو ضائع کریں۔

8. DNase ہضم کے لیے مقناطیسی اسٹینڈ سے سینٹری فیوج ٹیوب کو ہٹا دیں:

a DNase ورکنگ سلوشن تیار کریں: 10×DNase Buffer کا 10 μL، DNase کا 10 μL، نیوکلیز سے پاک پانی کا 80 μL لیں اور ایک نئی نیوکلیز فری سینٹری فیوج ٹیوب میں اچھی طرح مکس کریں۔

ب چھرے والے مقناطیسی موتیوں پر مشتمل ٹیوب میں 100 µL DNase I ورکنگ سلوشن شامل کریں، اور مقناطیسی موتیوں کو دوبارہ معطل کرنے کے لیے آہستہ سے اوپر نیچے کریں۔ کمرے کے درجہ حرارت پر 15 منٹ کھڑے رہیں اور انکیوبیشن کے دوران ہر 5 منٹ پر اچھی طرح مکس کریں۔

9. DNase ہضم ہونے کے بعد، 500 µL بفر RW2 شامل کریں اور مقناطیسی موتیوں کو دوبارہ معطل کرنے کے لیے آہستہ سے اوپر نیچے کریں۔ اور پھر ٹیوب کو مقناطیسی اسٹینڈ پر 30 سیکنڈ کے لیے رکھیں۔ جب مقناطیسی موتیوں کو مکمل طور پر منسلک کیا جائے تو، احتیاط سے ایک پائپیٹ کے ساتھ سپرنٹنٹ کو پھینک دیں

10. مرحلہ 9 دہرائیں۔

11. سینٹری فیوج ٹیوب کا ڈھکن کھولیں، اسے کمرے کے درجہ حرارت پر 5-10 منٹ کے لیے رکھیں تاکہ بقایا ایتھنول کے مکمل بخارات کو یقینی بنایا جا سکے۔ (نیوکلک ایسڈ کی پیداوار کو متاثر کرنے سے بچنے کے لیے موتیوں کو زیادہ خشک کرنے سے گریز کریں۔)

12. مقناطیسی اسٹینڈ کو ہٹا دیں، 50-100 μL نیوکلیز فری پانی شامل کریں اور مقناطیسی موتیوں کو دوبارہ بحال کرنے کے لیے آہستہ سے اوپر نیچے پائپ کریں، کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ تک کھڑے ہوں۔

13. سینٹری فیوج ٹیوب کو مقناطیسی اسٹینڈ پر رکھیں جب تک کہ مقناطیسی موتیوں کو مکمل طور پر جذب نہ کر لیا جائے اور اعلی طہارت RNA حاصل کرنے کے لیے ایک نئی 1.5 ملی لیٹر RNase فری سینٹری فیوج ٹیوب میں سپرناٹینٹ کو اسپیریٹ کریں۔

 

 

1. براہ کرم استعمال سے پہلے پروڈکٹ مینوئل کو احتیاط سے پڑھیں۔

2. مقناطیسی مالا کی معطلی کو سٹوریج کے دوران جمنے سے گریز کرنا چاہیے۔ مقناطیسی موتیوں کو حل کرنا آسان ہے، اور استعمال سے پہلے انہیں یکساں معطلی میں رکھنے کے لیے انہیں پوری طرح ہلانا چاہیے۔

3. نمونے میں مقناطیسی موتیوں کو شامل کرنے سے پہلے، نمونے میں ری ایجنٹس کو اچھی طرح سے ملانے کی ضرورت ہے۔

4. ایتھنول کو آر این اے کو خارج کرنے سے پہلے مکمل طور پر اتار چڑھاؤ کا شکار ہونا چاہیے تاکہ نیچے کی طرف ہونے والے تجربات کو متاثر کرنے والے بقایا ایتھنول سے بچ سکیں۔

5. موتیوں کو زیادہ دیر تک خشک نہ کریں کیونکہ یہ آر این اے کے اخراج کی کارکردگی کو متاثر کر سکتا ہے۔

14. اپنی حفاظت اور صحت کے لیے، براہ کرم حفاظتی شیشے، دستانے، یا حفاظتی لباس پہنیں۔ ماسک پہنیں، بات کرنے سے گریز کریں، اور کراس آلودگی سے بچنے کے لیے RNase فری ٹپس اور سینٹری فیوج ٹیوبیں استعمال کریں۔

 

صرف تحقیقی استعمال کے لیے!

 

 

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: میگ بائنڈ اینیمل ٹشو/ سیل کل آر این اے کٹ، چائنا میگ بائنڈ اینیمل ٹشو/ سیل کل آر این اے کٹ مینوفیکچررز، سپلائرز، فیکٹری