پروڈکٹ کا تعارف
|
پروڈکٹ کا نام |
بلی نہیں |
سپیک |
|
2 ایکس فاسٹ پیفس پی سی آر ماسٹر مکس |
G3305-01 |
1 ملی لیٹر |
|
G3305-05 |
5 × 1 ملی لیٹر |
مصنوعات کی تفصیل/تعارف
یہ فاسٹ Pfus PCR ماسٹر مکس ایک استعمال کے لیے تیار PCR پریمکس ہے جس میں ترمیم شدہ Pfu DNA پولیمریز، dNTPs اور آپٹمائزڈ PCR ری ایکشن بفر 2× کے ارتکاز میں روٹین PCR، کالونی PCR، PCR کے ساتھ پیچیدہ ٹیمپلیٹس اور اعلی GC ٹیمپلیٹس پر مشتمل ہے۔ پی سی آر ایمپلیفیکیشن صرف ٹیمپلیٹ، پرائمر اور ddH2O کو شامل کرکے انجام دیا جا سکتا ہے تاکہ مکس سلوشن کا ارتکاز 1× ہو۔ مضبوط ایمپلیفیکیشن کی صلاحیت، تیز ایمپلیفیکیشن اسپیڈ، ایکسٹینشن کی رفتار 5-15 s/kb تک، ہائی فیڈیلیٹی، ہائی سپیسٹیٹی، ایمپلیفیکیشن پروڈکٹ فلیٹ اینڈ ہے۔ لوڈنگ ڈائی کو پروڈکٹ میں شامل کر دیا گیا ہے، اور ایمپلیفائیڈ پروڈکٹ کو براہ راست ایگرز جیل الیکٹروفورسس کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
سٹوریج اور شپنگ کے حالات
گیلی برف کے ساتھ جہاز؛ -20 ڈگری پر اسٹور کریں، 12 ماہ کے لیے درست۔ بار بار منجمد پگھلنے سے گریز کریں۔
مصنوعات کے مشمولات
|
جزو |
G3305-01 |
G3305-05 |
|
2 ایکس فاسٹ پیفس پی سی آر ماسٹر مکس |
1 ملی لیٹر |
5 × 1 ملی لیٹر |
|
دستی |
ایک کاپی |
|
پرکھ پروٹوکول / طریقہ کار
1. تجویز کردہ پی سی آر ری ایکشن سسٹم
|
جزو |
20 ٪ce٪bcL rxn |
50 ٪ce٪bcL rxn |
حتمی ارتکاز |
|
سانچہ |
متغیر |
متغیر |
ضرورت کے مطابق |
|
فارورڈ پرائمر (10 μM)b |
0.8 μL |
2 μL |
0.4 μM |
|
ریورس پرائمر (10 μM)b |
0.8 μL |
2 μL |
0.4 μM |
|
2×فاسٹ پیفس پی سی آر ماسٹر مکس |
10 μL |
25 μL |
1× |
|
(DMSO، اختیاری) c |
(0.6 μL) |
(1.5 μL) |
(3%) |
|
ddH2O |
20 μL میں شامل کریں۔ |
50 μL میں شامل کریں۔ |
a: ٹیمپلیٹ کی زیادہ مقدار غیر مخصوص PCR مصنوعات کی تیاری کا خطرہ بڑھاتی ہے۔ ٹیمپلیٹ کی کم مقدار امپلیفیکیشن کی درستگی کو کم کرتی ہے۔ اگر ٹیمپلیٹ پلاسمڈ یا بیکٹیریوفیج سے ہے، تو 50 μL rnx میں 50ng-5pg شامل کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ اگر tempalted جینومک DNA ہے، 50 μL rnx میں 250ng-50ng شامل کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ اگر ٹیمپلیٹ cDNA ہے، تو اپنے اصل cDNA کو 2-100 بار کمزور کریں، اور رد عمل میں شامل کیے گئے پتلے cDNA کا حجم کل رد عمل کے حجم کے 10% سے زیادہ نہیں ہے۔ اگر templtae بیکٹیریل سیال یا خام نچوڑ کا نمونہ ہے، تو رد عمل میں شامل کردہ حجم کل رد عمل کے حجم کے 10% سے زیادہ نہیں ہے۔ ٹیمپلیٹ کی زیادہ مقدار غیر مخصوص پرورش کا باعث بنتی ہے۔ ٹیمپلیٹ کی کم مقدار کم پی سی آر ایمپلیفیکیشن کی کارکردگی کا باعث بنتی ہے۔
b: استعمال شدہ حتمی پرائمر حراستی کی حد ہے {{0}}۔{1}}۔{3}} μM، اور 0.4 μM تجویز کی جاتی ہے۔ بہت کم پرائمر کے نتیجے میں امپلیفیکیشن کی پیداوار کم یا کوئی نہیں ہو سکتی ہے، اور بہت زیادہ پرائمر غیر مخصوص امپلیفیکیشن کا نتیجہ ہو سکتا ہے۔
c: اعلی GC مواد ٹیمپلیٹ کے لیے، DMSO جس کا کل حجم 10% سے زیادہ نہ ہو۔
2. تجویز کردہ پی سی آر پروردن کی شرائط
|
قدم |
درجہ حرارت |
وقت |
سائیکلوں کی تعداد |
|
ابتدائی ڈینیچریشن |
98 ڈگری |
30 s-120 s |
1 |
|
ڈینیچریشن |
98 ڈگری |
5-10 s |
25-35 |
|
اینیلنگ بی |
50-72 ڈگری |
10-30 s |
|
|
ایکسٹینشن سی |
72 ڈگری |
5-15 سیکنڈ/kb |
|
|
حتمی توسیع |
72 ڈگری |
5-10 منٹ |
1 |
|
پکڑو |
4-16 ڈگری |
ہمیشہ کے لیے |
a: 30 سیکنڈ کا پری ڈینیچریشن وقت زیادہ تر روایتی ٹیمپلیٹس کے لیے موزوں ہے۔ پیچیدہ ٹیمپلیٹس کو 2 منٹ تک ڈینیچر کیا جا سکتا ہے۔
b: پیچیدہ ٹیمپلیٹس کی افزائش کے لیے، کنکیٹینٹ پرائمر پر مشتمل، اینیلنگ کا وقت 30 سیکنڈ تک بڑھایا جا سکتا ہے۔
c: تجویز کردہ توسیعی مرحلہ سادہ ٹیمپلیٹس کے لیے 72 ڈگری پر 5-10 s/kb ہے، جیسے کہ پلاسمڈ، 10-15 s/kb روٹین جینومک DNA ٹیمپلیٹس کے لیے، 15-30 s/kb پیچیدہ سانچے کے لیے .
نوٹ
1. استعمال کرتے وقت، براہ کرم پگھلائیں اور اچھی طرح مکس کریں، مکمل طور پر پگھلنے کے بعد 4 ڈگری مستحکم اسٹوریج میں کم از کم 2 ہفتوں تک رکھا جا سکتا ہے، بار بار جمنے اور پگھلنے سے گریز کریں۔
2. اپنی حفاظت اور صحت کے لیے، براہ کرم حفاظتی شیشے، دستانے، یا حفاظتی لباس پہنیں۔
صرف تحقیقی استعمال کے لیے!
ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: 2 ایکس فاسٹ پی ایف یو ایس پی سی آر ماسٹر مکس، چین 2 ایکس فاسٹ پی ایف یو ایس پی سی آر ماسٹر مکس مینوفیکچررز، سپلائرز، فیکٹری
