ای آر ٹریکر گرین

ER-Tracker green (Endoplasmic Reticulum Green Fluorescent Probe) سبز فلوروسینٹ ڈائی BODIPY FL اور Glibenclamide کا مجموعہ ہے۔ گلیبین کلیمائڈ گروپ اپنی کیمیائی ساخت میں، اصل میں ایک قسم II ذیابیطس کے علاج کی دوا ہے، اینڈوپلاسمک ریٹیکولم پر اے ٹی پی-حساس پوٹاشیم چینلز کے سلفونی لوریہ ریسیپٹر سے منسلک ہوتا ہے، اور اس طرح منتخب طور پر اینڈوپلاسمک ریٹیکولم میں مقامی کیا جا سکتا ہے اور اینڈوپلاسمک ریٹیکولم کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اینڈوپلاسمک لیبل لگانے کے لیے فلوروسینٹ پروب خلیات کے ریٹیکولم۔ ای آر ٹریکر گرین کی خاصیت اچھی ہے، یہ زندہ خلیوں کے اینڈوپلاسمک ریٹیکولم کے لیے انتہائی منتخب ہے، شاذ و نادر ہی مائٹوکونڈریا پر داغ لگاتا ہے، اور اس میں سائٹوٹوکسیٹی کم ہے۔ یہ تحقیقات جزوی طور پر زندہ خلیوں کی داغدار خصوصیات کو داغدار اور درست کرنے کے بعد برقرار رکھ سکتی ہے۔

خشک برف کے ساتھ جہاز؛ روشنی سے -20 ڈگری پر 12 ماہ تک اسٹور کریں۔

1. پرکھ کے کام کرنے والے حل کی تیاری:

1.1 یہ پروڈکٹ ایک 1 ایم ایم سٹوریج کا محلول ہے جسے تجربہ کرنے سے پہلے کمرے کے درجہ حرارت پر واپس گرم کیا جاتا ہے اور کم رفتار سے سنٹر فیوج کیا جاتا ہے تاکہ اس بات کو یقینی بنایا جا سکے کہ ریجنٹس ٹیوب کے نیچے تک ڈوب جائیں۔

1.2 اسے 0 میں پتلا کر دیا جاتا ہے۔{3}} بفر کے ذریعے اینڈوپلاسمک ریٹیکولم کا پتہ لگانے کے لیے μM ورکنگ سلوشن (ہینکس، پی بی ایس، وغیرہ، ہینکس کی سفارش کی جاتی ہے) یا بیسل میڈیم (سیرم کے بغیر)؛

2. سیل سٹیننگ (مندرجہ ذیل پروٹوکول ایڈرینٹ سیلز کے لیے ہے؛ معطلی سیل ایکسچینج کے لیے سینٹرفیوگریشن کی ضرورت ہے)

2.1 عام یا علاج شدہ خلیات کو ہر بار 3-5 منٹ کے لیے بفر کے ساتھ 1-2 بار دھویا جاتا ہے۔

2.2 پری وارمڈ اینڈوپلاسمک ریٹیکولم ایسے ورکنگ سلوشن شامل کریں، اور سیل کلچر انکیوبیٹر میں 37 ڈگری پر 20 منٹ تک انکیوبیشن کریں (انکیوبیشن ٹائم مختلف سیل اقسام اور حالتوں کی وجہ سے کچھ حد تک ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے)؛

2.3۔ اینڈوپلاسمک ریٹیکولم پرکھ کے کام کرنے والے محلول کو ہٹا دیں اور ہر ایک کو 3-5 منٹ کے لیے 2-3 بار بفر سے دھوئیں؛

2.4 سبز فلوروسینس (Ex=504 nm, Em=511 nm) فلم کو براہ راست یا اینٹی فیڈ ماؤنٹنگ میڈیم (تجویز کردہ G1401) کے ساتھ بلاک کرنے کے بعد فلوروسینس مائکروسکوپ کے تحت دیکھا جاتا ہے۔

3. سیل فکسیشن (اختیاری):

نوٹ: داغ لگنے کے بعد، اس پروڈکٹ کو ٹھیک کیا جا سکتا ہے، لیکن فلوروسینٹ سگنل فکس کرنے کے بعد کم ہو جائے گا۔ اسے پروسیسنگ کے لیے سوراخ نہیں کیا جا سکتا، اور سوراخ کرنے سے فلوروسینٹ لیبلنگ غائب ہو جائے گی۔

3.1 داغ دار اور دھوئے گئے علاج شدہ خلیات کو فکسیٹیو (تجویز کردہ G1101) میں شامل کیا جاتا ہے اور کمرے کے درجہ حرارت پر 5 منٹ کے لیے مقرر کیا جاتا ہے۔

3.2 حل کرنے والے کو ہٹا دیں اور ہر بار 3-5 منٹ کے لیے بفر سے 2-3 بار دھوئیں؛

3.3 دھونے کے بعد، خلیات کو بعد میں بلاک کیا جا سکتا ہے، خوردبینی طور پر جانچ پڑتال کی جا سکتی ہے یا تجرباتی ضروریات کے مطابق مزید داغدار کیا جا سکتا ہے۔

نوٹ

1. خلیات کی مختلف اقسام اور حالتوں کی وجہ سے، ڈائی کے کام کرنے والے ارتکاز اور انکیوبیشن کے وقت کو مناسب طریقے سے ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔

2. داغ لگنے کے بعد پروب کو علاج کے لیے سوراخ نہیں کیا جا سکا، اور سوراخ کرنے کے بعد سیل فلوروسینس تقریباً مکمل طور پر غائب ہو گیا۔

3. گلیبین کلیمائیڈ کی فارماسولوجک خصوصیات اینڈوپلاسمک ریٹیکولم کے بعض افعال کو متاثر کر سکتی ہیں۔ کچھ مخصوص خلیوں میں سلفونی لوریہ ریسیپٹرز کے متغیر اظہار کے نتیجے میں غیر اینڈوپلاسمک ریٹیکولم مخصوص داغ بھی ہو سکتا ہے۔

4. زندہ خلیوں کو داغدار اور دھوتے وقت، پرکھ کے کام کرنے والے حل اور واشنگ بفر کو 37 ڈگری پر پہلے سے گرم کرنے کی ضرورت ہوتی ہے۔ انکیوبیٹر میں انکیوبیشن کے ذریعے داغ اور دھلائی مکمل کی جاتی ہے تاکہ درجہ حرارت کے فرق کے محرک سے خلیات کی شکلیات پر اثر نہ پڑے۔

5. فلوروسینس بجھنے سے روکنے کے لیے، داغ لگانے کے پورے عمل کو روشنی سے دور کرنے کی ضرورت ہے۔

6. بار بار جمنے اور پگھلنے سے بچنے کے لیے پروب ماسٹر مکسز کو علیحدہ کنٹینرز میں ذخیرہ کیا جانا چاہیے۔ فضلے سے بچنے کے لیے، داغدار محلول ضرورت کے مطابق تیار کیا جاتا ہے، استعمال کے لیے تیار ہے۔

7. اپنی صحت اور حفاظت کے لیے، براہ کرم آپریشن کے دوران لیب کوٹ اور دستانے پہنیں۔

صرف تحقیقی استعمال کے لیے!

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: er-tracker green, China er-tracker green مینوفیکچررز، سپلائرز، فیکٹری