Calcein AM سیل وائبلٹی پرکھ کٹ

 

پروڈکٹ کا نام	بلی نہیں	سپیک
Calcein AM سیل وائبلٹی پرکھ کٹ (CCK-F)	G1609-100T	100T
	G1609-500T	500T

 

 

Calcein AM Calcein (Calcein Acetoxymethyl Ester) پر مبنی ہے، اور ایک acetylmethoxymethyl ester (AM) گروپ متعارف کرایا ہے، جو نہ صرف Calcein کے مالیکیولر حصے کو چھپاتا ہے جو کیلشیم کو چیلیٹ کرتا ہے بلکہ اس کی ہائیڈروفوبکٹی کو بھی بڑھاتا ہے، اس طرح Calcein AM کو آسانی سے میمبرانیٹ میں داخل کرنے کی اجازت دیتا ہے۔ زندہ خلیات کی، اور اس کے ذریعے کترنے کے لیے کیلسن میں اینڈوجینس سیلولر ایسٹریسس۔ Calcein، جس نے اپنا AM گروپ کھو دیا ہے، آسانی سے سیل کی جھلی سے نہیں گزر سکتا اور اس طرح سیل کے اندر برقرار رہتا ہے۔ اس کے علاوہ، چیلیٹڈ کیلشیم کا مالیکیولر حصہ جزوی طور پر بے نقاب ہوتا ہے، جس سے کیلسن پروب زندہ خلیے میں کیلشیم آئنوں سے منسلک ہوتا ہے اور ایک مضبوط سبز فلوروسینس خارج کرتا ہے۔ تاہم، مردہ خلیوں میں ایسٹیریز کی کمی ہوتی ہے اور اسے Calcein AM میں ہائیڈولائز نہیں کیا جا سکتا، اس لیے یہ مردہ خلیوں کا لیبل نہیں لگا سکتا۔ Calcein AM میں کم سائٹوٹوکسیٹی ہے اور اس کا سیلولر افعال پر بہت کم اثر پڑتا ہے، جیسے سیل کے پھیلاؤ یا لیمفوسائٹ کیموٹیکسس، یہ زندہ خلیوں کو داغدار کرنے کے لیے ایک بہترین فلوروسینٹ تحقیقات بناتا ہے۔

 

یہ پروڈکٹ، Calcein AM Cell Activity Assay Kit، جسے سیل فلوروسینس کاؤنٹنگ کٹ (CCK-F) کے نام سے بھی جانا جاتا ہے، ایک پرکھ کی کٹ ہے جو Calcein AM فلوروسینٹ پروب کے ساتھ لائیو سیلز کا لیبل لگا کر خلیات کی سرگرمی، زہریلا، اور پھیلاؤ کا جائزہ لیتی ہے۔ اس کٹ کو بہتر بنایا گیا ہے اور اسے ٹیون کیا گیا ہے، اس میں نہ صرف پتہ لگانے کی اعلیٰ حساسیت اور وسیع لکیری رینج ہے، بلکہ خلیات کی کھوج کو مکمل کرنے کے لیے صرف ایک مختصر انکیوبیشن وقت کی ضرورت ہے۔ یہ کام کرنا آسان ہے اور اس کے لیے ریڈیوآئسوٹوپ لیبلنگ یا کرسٹلائزیشن اور تحلیل جیسے اقدامات کی ضرورت نہیں ہے، جو تجرباتی کارروائیوں سے پیدا ہونے والی غلطیوں کو کم کر سکتے ہیں اور درستگی اور تولیدی صلاحیت کو بہتر بنا سکتے ہیں۔

 

 

گیلی برف کے ساتھ جہاز؛ اندھیرے میں -20 ڈگری پر اسٹور کریں۔ بار بار جمنے اور پگھلنے سے بچنے کی کوشش کریں، جو 12 ماہ کے لیے درست ہے۔

 

 

اجزاء نمبر	جزو	G1609-100T	G1609-500T
G1609-1	Calcein AM حل	100 μL	500 μL
G1609-2	CCK-F پرکھ بفر	10 ملی لیٹر	50 ملی لیٹر
دستی		ایک کاپی

 

 

1. Calcein AM کام کرنے والے حل کی تیاری

ایک 96-وییل سیل کلچر پلیٹ کے لیے، فی کنواں 100ul کیلسین AM ورکنگ سلوشن استعمال کریں۔ کیلسن اے ایم ورکنگ سلوشن کی مناسب مقدار تیار کریں جیسا کہ درج ذیل جدول میں بتایا گیا ہے اور اچھی طرح مکس کریں۔

 

جزو	10 assays	50 assays	100 assays
Calcein AM حل	10 μL	50 μL	100 μL
CCK-F پرکھ بفر	1 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	10 ملی لیٹر

 

2. پابند سیل کا پتہ لگانا:

درج ذیل اقدامات 96-کنویں پلیٹ کا پتہ لگانے کی اسکیم سے مطابقت رکھتے ہیں، اور دیگر میوٹی ویل پلیٹس کے نظام کو صورتحال کے مطابق ایڈجسٹ کرنے کی ضرورت ہے۔

a سیل کی بیجائی: خلیات کو ایک خاص کثافت پر 96-کنویں پلیٹ میں یکساں طور پر بیج دیا جاتا ہے، اور ان کا علاج دوائیوں یا دیگر پری ٹریٹمنٹس سے کیا جاتا ہے (بیج کی کثافت کا تعین خلیات کے سائز، شرح نمو وغیرہ جیسے عوامل سے ہوتا ہے)؛

ب (اختیاری) سیل واشنگ: کلچر میڈیم کو ہٹا دیں اور سیل کو ایک سے دو بار PBS (تجویز کردہ G4202) سے دھوئیں تاکہ سیرم، فینول ریڈ اور/یا پرکھ میں مداخلت کرنے والی ادویات کو ہٹایا جا سکے۔

c پروب لیبلنگ: سیل کلچر میڈیم یا PBS بفر کو ہٹانے کے بعد، 100 μL calcein AM ورکنگ سلوشن شامل کریں اور 37 ڈگری پر اندھیرے میں 30 منٹ تک انکیوبیٹ کریں۔

d (اختیاری) سیل انکیوبیشن: نئے سیل کلچر میڈیم کے ساتھ 15-30 منٹ تک انکیوبیشن جاری رکھیں تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ انٹرا سیلولر کیلسن AM مکمل طور پر ہائیڈولائزڈ ہے۔

e فلوروسینس کا پتہ لگانا: انکیوبیشن کے بعد، فلوروسینس مائکروپلیٹ ریڈر کے ساتھ فلوروسینس کی پیمائش کریں (Calcein AM پروب کی زیادہ سے زیادہ اتیجیت طول موج 501 nm ہے، اور زیادہ سے زیادہ اخراج طول موج 521 nm ہے۔) اور سیل کی قابل عملیت کا حساب لگائیں۔ فلوروسینس کی شدت قابل عمل خلیوں کی تعداد کے متناسب ہے۔ فلوروسینس مائکروسکوپی کا استعمال داغدار نتائج کا مشاہدہ کرنے کے لیے بھی کیا جا سکتا ہے۔

3. معطلی سیل پرکھ:

a سیل سیڈنگ: خلیات کو ایک خاص کثافت پر 24-کنویں پلیٹ میں یکساں طور پر بیج دیا جاتا ہے، اور ان کا علاج دوائیوں یا دیگر پری ٹریٹمنٹس سے کیا جاتا ہے (بیج کی کثافت کا تعین سیل کے سائز، نمو کی رفتار، وغیرہ جیسے عوامل سے کیا جاتا ہے)؛

ب (اختیاری) سیل واشنگ: سیل کلچر کو 1،000×g پر 3-5 منٹ کے لیے، سپرنٹنٹ کو ہٹا دیں اور سیل کو دو بار پی بی ایس کے ساتھ دھوئیں تاکہ سیرم، فینول ریڈ اور/یا ادویات کو ہٹایا جا سکے جو خلیات میں مداخلت کرتے ہیں۔ پرکھ

c پروب لیبلنگ: 1000 گرام پر 3-5 منٹ تک سینٹرفیوگ کرنے کے بعد، سیل کلچر میڈیم یا PBS بفر کو ہٹا دیں، مناسب مقدار میں Calcein AM ورکنگ سلوشن شامل کریں، اور اندھیرے میں 30 منٹ تک 37 ڈگری پر انکیوبیٹ کریں۔

d (اختیاری) سیل انکیوبیشن: نئے سیل کلچر میڈیم کے ساتھ 15-30 منٹ تک انکیوبیشن جاری رکھیں تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ انٹرا سیلولر کیلسن AM مکمل طور پر ہائیڈولائزڈ ہے۔

e فلوروسینس کا پتہ لگانا: انکیوبیشن کے بعد، فلوروسینس مائکروپلیٹ ریڈر یا فلو سائٹومیٹری کے ساتھ فلوروسینس کی پیمائش کریں (کیلسن اے ایم پروب کی زیادہ سے زیادہ اتیجیت طول موج 501 nm ہے، اور زیادہ سے زیادہ اخراج طول موج 521 nm ہے۔)۔ سیل کی عملداری فلوروسینس کی شدت کے متناسب ہے۔ تجربے کے مقصد پر منحصر ہے، نیوکلی کو دوسرے آلات جیسے فلوروسینس مائیکروسکوپی کے ساتھ مزید انسداد یا پتہ لگایا جا سکتا ہے۔

 

 

1. ری ایجنٹ کے نقصان کو کم کرنے کے لیے استعمال کرنے سے پہلے کیلسین AM محلول کو مختصر طور پر سینٹری فیوج کریں۔

2. Calcein AM مرطوب ماحول میں آسانی سے گل جاتا ہے۔ وصول ہونے پر علی کوٹ، مضبوطی سے مہر لگائیں، اور -20 ڈگری پر اسٹور کریں۔

3. Calcein AM پانی کے محلول میں غیر مستحکم ہے۔ Calcein AM ورکنگ سلوشن استعمال کے لیے تیار ہے اور 24 گھنٹے کے اندر استعمال کے لیے درست ہے۔

4. مختلف خلیوں کی اقسام کے لیے بہترین انکیوبیشن کا وقت مختلف ہوتا ہے، جسے داغ دھبے کے نتائج کی بنیاد پر ایڈجسٹ اور بہتر بنایا جا سکتا ہے۔

5. جب پیمائش کے لیے فلوروسینس مائیکرو پلیٹ ریڈر استعمال کیا جائے تو خلیات کو بڑھانے کے لیے ایک سیاہ ملٹی ویل پلیٹ کا استعمال کریں۔

6. فلوروسینٹ رنگ بجھانے، سنبھالنے اور روشنی سے دور ذخیرہ کرنے کے تابع ہیں۔

7. اپنی حفاظت اور صحت کے لیے، براہ کرم حفاظتی شیشے، دستانے، یا حفاظتی لباس پہنیں۔

 

صرف تحقیقی استعمال کے لیے!

 

 

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: calcein am cell viability assay kit, China calcein am cell viability assay kit مینوفیکچررز، سپلائرز، فیکٹری